Pichia pastoris Aldehit Dehidrogenaz (Ald) Genlerinin Karakterizasyonu ve Asetat Metabolizmasındaki Rollerinin Araştırılması

Metilotrofik bir maya olan Pichia pastoris rekombinant protein üretimlerinde sıklıkla kullanılan başarılı bir ekspresyon sistemidir. Sunduğu pek çok avantaj sebebiyle tercih edilen bu ekspresyon sistemini geliştirmeye yönelik çalışmalar devam etmekte ve bu sayede hem daha verimli üretim hem de daha geniş ürün yelpazesi için kullanılabilir kılmak hedeflenmektedir. Önceki çalışmalarımız kapsamında ADH3 promotoru ile yapılan rekombinant protein üretimlerinde etanolün fermentasyonun başlangıcında asetata dönüştüğü ve bu asetatın yaklaşık %3 konsantrasyonlara ulaştığında toksik etki yaparak hücre üremesini ve rekombinant protein üretimini tamamen durdurduğu gözlenmiştir. Ayrıca, asetatın çeşitli promotorlar ile yapılan rekombinant protein üretimleri üzerine olan olumsuz etkisinin araştırıldığı çalışmalar bulunmaktadır. P. pastoris asetat metabolizması henüz aydınlatılmamış bir mekanizmadır ve ilk kez bu çalışma kapsamında araştırılmıştır. Bu çalışma kapsamında P. pastoris asetat metabolizmasında rol oynayan genler araştırılmış ve fonksiyonel rolleri ortaya konulmuştur. Çalışmanın konusu genler ile yapılan çalışmalarda karbon kaynağına bağlı olarak genlerin farklı fonksiyonlara sahip olduğu belirlenmiştir. İlgili genlerin karakterize edilmesi ile asetat metabolizmanın aydınlatılmış ve P. pastoris ekspresyon sisteminin daha etkin kullanılmasını sağlayacak önemli veriler elde edilmiştir. Elde edilen veriler sonucunda ilgili genlerin mutasyonu veya aşırı ekspresyonu ile daha yüksek rekombinant protein üretimi seviyesine sahip P. pastoris suşları geliştirilmiştir. Bu sayede, ADH3 promotoru ile yapılan rekombinant protein üretimine yönelik alternatif P. pastoris suşları geliştirilmiş, alternatif karbon kaynaklarının belirlenmesi çalışmaları yapılmış ve ilgili genlerin promotorlarının protein üretimindeki kullanım potansiyelleri de test edilmiştir.